不同炮制方法对何首乌质量的影响
作者：周燕华 赵 一 李爱媛 陈超树
单位：周燕华 赵 一 李爱媛 陈超树广西中医学院 530001 南宁市明秀东路21号
关键词：何首乌；炮制；质量
广西中医药/990230 何首乌是常用中药，自古有生品与制品之分，二者功用各异。临床上生品少用。何首乌的炮制，历代多采用蒸法和煮法，以黑豆为辅料炮制；炮制时间可参考“煮熟”、“煮透”乃至“九蒸九晒”。现代药理研究已证实，制何首乌具有增强免疫、改善记忆障碍及抗衰老等作用；而生何首乌有一定毒性，长时间服用可引起动物消瘦、倦怠、动作迟缓和死亡。但有关炮制时间对疗效的影响，研究甚少，仅有初步研究表明，何首乌蒸32h较九蒸九晒为好〔1〕。目前，《中华人民共和国药典》尚未对其炮制时间及其质量标准作出具体、明确的规定。现时所遵循的法规(地方炮制规范)仍是沿用历史的习惯与经验，由于认识不一，遵循不一，差别很大。广西主要采用煮法炮制，强调煮至熟透，一般需12h(《广西炮制规范》)。我们对何首乌的12h煮制品及32h蒸品进行了初步研究。现报道如下。
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1 实验材料
1.1 药材与炮制 生何首乌购自南宁药材站，为同一产地的同一批药材。经鉴定，为Polygonum multiflorum Thunb.的块根。
32h蒸制品：按文献〔1〕法，何首乌片用黑豆汁拌匀，润透并吸尽豆汁后蒸32h，干燥，作第Ⅰ组(以下简称Ⅰ组)
12h煮制品：采用南宁药材站按传统方法炮制的制何首乌。其方法为：净何首乌个，稍浸，润透后与黑豆同煮12h，至何首乌熟透并吸尽水分，切片，干燥(《广西炮制规范》)，作第Ⅱ组(以下简称Ⅱ组)
1.2 实验动物 小白鼠，昆明种，体重18～22g，雌雄兼用。由广西中医学院实验动物室提供(合格证号：桂医动字第11004号)。
1.3 实验药品 环磷酰胺(Cy)：上海华联制药有限公司生产，批号960905.植物血凝素(PHA)：广西医科大学自制。氢溴酸东莨菪碱注射液(Sc)：成都制药一厂生产，批号92110319.
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2 方法与结果
小鼠按配对比较法分组。每组10～12只。
水煎液：两种何首乌各先浸泡1h，再分别煎煮2次，每次20min.
给药时间及方式：连续给药15天，每日1次，以0.2ml/10g灌胃给药。
给药剂量：根据文献〔1～2〕确定给药剂量3.0g/kg和4.5g/kg，根据文献〔2〕，此剂量分别等效于成人用量20g/50kg和30g/50kg.对照组以生理盐水代替药液灌胃。
2.1 对体重和免疫的影响
2.1.1 对正常小鼠体重的影响 小鼠50只，均分为5组。于末次给药后24h逐个称重。结果见表1.
表1 对正常小鼠体重的影响 (
±s，n=10) 组 别
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剂量(g.kg-1)
体 重(g)
对照组
—
28.20±2.38
Ⅰ组
4.5
28.30±2.56⑥
3.0
28.45±2.37
Ⅱ组
, 百拇医药
4.5
23.50±2.22③⑥
3.0
26.20±5.14
注：与对照组比较①P<0.05；②P<0.01；③P<0.001；
组间同剂量比较④P<0.05；⑤P<0.01；
⑥P<0.001.
表1结果表明：对正常小鼠，Ⅱ组有抑制体重增加的作用，其抑制作用随用药剂量增加而增强；而Ⅰ组无影响。
2.1.2 对抗免疫抑制剂所致小鼠免疫器官重量及体重下降的作用 小鼠48只，均分为4组。用药剂量3.0g/kg.于第1、3、5、7、10天皮下注射环磷酰胺(Cy)40mg/kg.末次给药后逐个称重，眼眶放血后处死，分离胸腺、脾脏、肾上腺，于1/万天平上称其湿重，计算每10g体重的器官系数(mg)。结果见表2.
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表2 对免疫抑制小鼠免疫器官重量及体重的影响
(±s，n=12) 组 别
免疫器官重量〔mg.(体重10g)-1〕
增重(g)
胸 腺
脾 脏
肾上腺
正常对照组
27.6±8.9
59.4±19.1
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2.26±0.70
8.30±2.56
模型组(Cy)
9.5±4.4③
52.2±19.4
2.16±0.70
3.20±1.50③
(Cy+Ⅰ)组
8.7±4.4③
43.4±7.0①⑧
2.20±0.60
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4.91±1.44②⑤⑨
(Cy+Ⅱ)组
6.4±1.5③④
33.8±7.2③⑤⑧
2.31±0.65
-0.75±2.32③⑥⑨
注：与正常对照组比较①P<0.05；②P<0.01；③P<0.001；与模型组比较④P<0.05；⑤P<0.01；⑥P<0.001；组间(同剂量)比较⑦P<0.05；⑧P<0.01；
⑨P<0.001(下同)
表2结果表明，对免疫抑制剂Cy引起的免疫器官重量下降，二者均无对抗作用，反而引起胸腺和脾脏重量的下降，其中Ⅱ组的作用显著；而对体重的下降，Ⅰ组有对抗作用，Ⅱ组却表现出增强抑制的作用，且作用非常显著。说明Ⅱ组有免疫抑制作用。
, 百拇医药
2.1.3 对小鼠淋巴细胞转化率的影响〔3〕
小鼠48只，均分为4组。用药剂量30g/kg.于第1，3，5，7，9，11天皮下注射Cy40mg/kg，第3、5、7、9、11天肌注PHA6mg/kg.末次给药后24h眼眶采血涂片，计算淋巴细胞转化率。结果见表3.
表3 对小鼠淋巴细胞转化率的影响(±s，n=12) 组 别
淋巴细胞转化百分率(%)
正常对照组
60.25±5.06
模型组(Cy)
, http://www.100md.com 40.36±6.07③
(Cy+Ⅰ)组
48.75±7.16③⑤⑧
(Cy+Ⅱ)组
40.16±4.91③⑤
表3结果表明：Ⅰ组能显著提高淋巴细胞的转化率，Ⅱ组无此作用。2.2 对记忆的影响〔2〕
2.2.1 对小鼠记忆获得障碍的改善作用 按跳台法进行〔2〕。小鼠60只，均分为6组。给药第14天药后45min，腹腔注射氢溴酸东莨菪碱(Sc)1.5mg/kg，15min后训练。次日给药后1h测验。结果见表4.
, 百拇医药 表4 对小鼠记忆获得障碍的改善作用(±s，n=10) 组别
剂量(g.kg-1)
潜伏期
5min内错误次数
正常对照组
—
260.0±50.6
0.44±0.53
模型组(Sc)
—
, http://www.100md.com
153.0±49.0③
2.50±1.07③
(Sc+Ⅰ)组
4.5
200.0±89.0⑨
1.23±1.09①④⑧
(Sc+Ⅰ)组
3.0
187.4±119.0
1.06±0.86⑤⑧
, 百拇医药 (Sc+Ⅱ)组
4.5
44.0±51.0③⑥⑨
3.33±1.50③⑧
(Sc+Ⅱ)组
3.0
104.0±50.0③④
3.0±1.63③⑧
表4结果表明，对小鼠记忆获得障碍，Ⅰ组有显著的改善作用；Ⅱ组不仅没有改善作用，反而有增强记忆障碍的作用。二者差异极显著。2.2.2 对小鼠记忆再现障碍的改善作用
, http://www.100md.com
按跳台法进行〔2〕。小鼠72只，均分为6组。给药第14天药后1h进行训练，次日给药后1h以30%乙醇(Alc)按0.1ml/10g灌胃，30min后测验。结果见表5.
表5 对小鼠记忆再现障碍的改善作用(±s，n=12) 组 别
剂量(g.kg-1)
潜伏期(s)
5min内错误次数
正常对照组
—
266.1±44.0
, 百拇医药
0.54±0.68
模型组(Alc)
—
167.0±104.4②
2.0±1.63②
(Alc+Ⅰ)组
4.5
198.7±106.5
0.82±0.67④⑦
(Alc+Ⅰ)组
3.0
, 百拇医药
231.0±107.0
0.79±0.68⑤⑧
(Alc+Ⅱ)组
4.5
122.4±76.3
2.0±1.40②⑦
(Alc+Ⅱ)组
3.0
135.2±124.2
2.33±1.75②⑧
表5结果表明，对小鼠记忆再现障碍，Ⅰ组有显著的改善作用；Ⅱ组无改善作用。Ⅰ、Ⅱ组间差异显著。2.3 急性毒性试验 据报道〔4〕，生何首乌的乙醇提取液对小鼠有急性毒性作用，但水提液无毒。因此，我们采用95%乙醇渗漉液(1∶8)〔4〕，按文献〔2〕法，以0.35ml/kg 1次灌胃给药，对小鼠进行急性毒性试验，观察7天。
, 百拇医药
结果：用药量280g/kg.按文献公式〔2〕计算，相当于人临床用量30g/50kg的466倍(临床常用量为9～15g)。两组小鼠均未见死亡，也未见腹泻、精神不振等异常。
3 讨 论
本实验结果表明，12h煮制品各项指标均不如32h蒸制品；其中12h煮制品不仅没有免疫增强作用，反而有免疫抑制作用，对记忆障碍亦有增强的趋势。其主要原因可能在于炮制时间不够，其炮制过程是否还有其他因素影响，尚有待进一步查明。而蒸32h是否为最佳的炮制条件(炮制温度、炮制时间、辅料等)有待于进一步研究。
谢沛珊老师协助部分实验，谨致谢忱。
参考文献
[1] 叶定江，朱 荃，祁辉林，等.何首乌及其炮制品的免疫药理学研究.中药通报，1987，12(3)∶149.
[2] 陈 奇.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出版社，1993.33～34，118～119，738～740，892～894.
[3] 北京医学院微生物学教研室.实验免疫学.北京：人民卫生出版社，1980.453.
[4] 沈道修，顾月芳，任晓瑛.何首乌炮制的药理研究.中成药，1982，1(1)∶21.
(1999-01-20收稿), http://www.100md.com
单位：周燕华 赵 一 李爱媛 陈超树广西中医学院 530001 南宁市明秀东路21号
关键词：何首乌；炮制；质量
广西中医药/990230 何首乌是常用中药，自古有生品与制品之分，二者功用各异。临床上生品少用。何首乌的炮制，历代多采用蒸法和煮法，以黑豆为辅料炮制；炮制时间可参考“煮熟”、“煮透”乃至“九蒸九晒”。现代药理研究已证实，制何首乌具有增强免疫、改善记忆障碍及抗衰老等作用；而生何首乌有一定毒性，长时间服用可引起动物消瘦、倦怠、动作迟缓和死亡。但有关炮制时间对疗效的影响，研究甚少，仅有初步研究表明，何首乌蒸32h较九蒸九晒为好〔1〕。目前，《中华人民共和国药典》尚未对其炮制时间及其质量标准作出具体、明确的规定。现时所遵循的法规(地方炮制规范)仍是沿用历史的习惯与经验，由于认识不一，遵循不一，差别很大。广西主要采用煮法炮制，强调煮至熟透，一般需12h(《广西炮制规范》)。我们对何首乌的12h煮制品及32h蒸品进行了初步研究。现报道如下。
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1 实验材料
1.1 药材与炮制 生何首乌购自南宁药材站，为同一产地的同一批药材。经鉴定，为Polygonum multiflorum Thunb.的块根。
32h蒸制品：按文献〔1〕法，何首乌片用黑豆汁拌匀，润透并吸尽豆汁后蒸32h，干燥，作第Ⅰ组(以下简称Ⅰ组)
12h煮制品：采用南宁药材站按传统方法炮制的制何首乌。其方法为：净何首乌个，稍浸，润透后与黑豆同煮12h，至何首乌熟透并吸尽水分，切片，干燥(《广西炮制规范》)，作第Ⅱ组(以下简称Ⅱ组)
1.2 实验动物 小白鼠，昆明种，体重18～22g，雌雄兼用。由广西中医学院实验动物室提供(合格证号：桂医动字第11004号)。
1.3 实验药品 环磷酰胺(Cy)：上海华联制药有限公司生产，批号960905.植物血凝素(PHA)：广西医科大学自制。氢溴酸东莨菪碱注射液(Sc)：成都制药一厂生产，批号92110319.
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2 方法与结果
小鼠按配对比较法分组。每组10～12只。
水煎液：两种何首乌各先浸泡1h，再分别煎煮2次，每次20min.
给药时间及方式：连续给药15天，每日1次，以0.2ml/10g灌胃给药。
给药剂量：根据文献〔1～2〕确定给药剂量3.0g/kg和4.5g/kg，根据文献〔2〕，此剂量分别等效于成人用量20g/50kg和30g/50kg.对照组以生理盐水代替药液灌胃。
2.1 对体重和免疫的影响
2.1.1 对正常小鼠体重的影响 小鼠50只，均分为5组。于末次给药后24h逐个称重。结果见表1.
表1 对正常小鼠体重的影响 (
±s，n=10) 组 别, http://www.100md.com
剂量(g.kg-1)
体 重(g)
对照组
—
28.20±2.38
Ⅰ组
4.5
28.30±2.56⑥
3.0
28.45±2.37
Ⅱ组
, 百拇医药
4.5
23.50±2.22③⑥
3.0
26.20±5.14
注：与对照组比较①P<0.05；②P<0.01；③P<0.001；
组间同剂量比较④P<0.05；⑤P<0.01；
⑥P<0.001.
表1结果表明：对正常小鼠，Ⅱ组有抑制体重增加的作用，其抑制作用随用药剂量增加而增强；而Ⅰ组无影响。
2.1.2 对抗免疫抑制剂所致小鼠免疫器官重量及体重下降的作用 小鼠48只，均分为4组。用药剂量3.0g/kg.于第1、3、5、7、10天皮下注射环磷酰胺(Cy)40mg/kg.末次给药后逐个称重，眼眶放血后处死，分离胸腺、脾脏、肾上腺，于1/万天平上称其湿重，计算每10g体重的器官系数(mg)。结果见表2.
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表2 对免疫抑制小鼠免疫器官重量及体重的影响
(
±s，n=12) 组 别免疫器官重量〔mg.(体重10g)-1〕
增重(g)
胸 腺
脾 脏
肾上腺
正常对照组
27.6±8.9
59.4±19.1
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2.26±0.70
8.30±2.56
模型组(Cy)
9.5±4.4③
52.2±19.4
2.16±0.70
3.20±1.50③
(Cy+Ⅰ)组
8.7±4.4③
43.4±7.0①⑧
2.20±0.60
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4.91±1.44②⑤⑨
(Cy+Ⅱ)组
6.4±1.5③④
33.8±7.2③⑤⑧
2.31±0.65
-0.75±2.32③⑥⑨
注：与正常对照组比较①P<0.05；②P<0.01；③P<0.001；与模型组比较④P<0.05；⑤P<0.01；⑥P<0.001；组间(同剂量)比较⑦P<0.05；⑧P<0.01；
⑨P<0.001(下同)
表2结果表明，对免疫抑制剂Cy引起的免疫器官重量下降，二者均无对抗作用，反而引起胸腺和脾脏重量的下降，其中Ⅱ组的作用显著；而对体重的下降，Ⅰ组有对抗作用，Ⅱ组却表现出增强抑制的作用，且作用非常显著。说明Ⅱ组有免疫抑制作用。
, 百拇医药
2.1.3 对小鼠淋巴细胞转化率的影响〔3〕
小鼠48只，均分为4组。用药剂量30g/kg.于第1，3，5，7，9，11天皮下注射Cy40mg/kg，第3、5、7、9、11天肌注PHA6mg/kg.末次给药后24h眼眶采血涂片，计算淋巴细胞转化率。结果见表3.
表3 对小鼠淋巴细胞转化率的影响(
±s，n=12) 组 别淋巴细胞转化百分率(%)
正常对照组
60.25±5.06
模型组(Cy)
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(Cy+Ⅰ)组
48.75±7.16③⑤⑧
(Cy+Ⅱ)组
40.16±4.91③⑤
表3结果表明：Ⅰ组能显著提高淋巴细胞的转化率，Ⅱ组无此作用。2.2 对记忆的影响〔2〕
2.2.1 对小鼠记忆获得障碍的改善作用 按跳台法进行〔2〕。小鼠60只，均分为6组。给药第14天药后45min，腹腔注射氢溴酸东莨菪碱(Sc)1.5mg/kg，15min后训练。次日给药后1h测验。结果见表4.
, 百拇医药 表4 对小鼠记忆获得障碍的改善作用(
±s，n=10) 组别剂量(g.kg-1)
潜伏期
5min内错误次数
正常对照组
—
260.0±50.6
0.44±0.53
模型组(Sc)
—
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153.0±49.0③
2.50±1.07③
(Sc+Ⅰ)组
4.5
200.0±89.0⑨
1.23±1.09①④⑧
(Sc+Ⅰ)组
3.0
187.4±119.0
1.06±0.86⑤⑧
, 百拇医药 (Sc+Ⅱ)组
4.5
44.0±51.0③⑥⑨
3.33±1.50③⑧
(Sc+Ⅱ)组
3.0
104.0±50.0③④
3.0±1.63③⑧
表4结果表明，对小鼠记忆获得障碍，Ⅰ组有显著的改善作用；Ⅱ组不仅没有改善作用，反而有增强记忆障碍的作用。二者差异极显著。2.2.2 对小鼠记忆再现障碍的改善作用
, http://www.100md.com
按跳台法进行〔2〕。小鼠72只，均分为6组。给药第14天药后1h进行训练，次日给药后1h以30%乙醇(Alc)按0.1ml/10g灌胃，30min后测验。结果见表5.
表5 对小鼠记忆再现障碍的改善作用(
±s，n=12) 组 别剂量(g.kg-1)
潜伏期(s)
5min内错误次数
正常对照组
—
266.1±44.0
, 百拇医药
0.54±0.68
模型组(Alc)
—
167.0±104.4②
2.0±1.63②
(Alc+Ⅰ)组
4.5
198.7±106.5
0.82±0.67④⑦
(Alc+Ⅰ)组
3.0
, 百拇医药
231.0±107.0
0.79±0.68⑤⑧
(Alc+Ⅱ)组
4.5
122.4±76.3
2.0±1.40②⑦
(Alc+Ⅱ)组
3.0
135.2±124.2
2.33±1.75②⑧
表5结果表明，对小鼠记忆再现障碍，Ⅰ组有显著的改善作用；Ⅱ组无改善作用。Ⅰ、Ⅱ组间差异显著。2.3 急性毒性试验 据报道〔4〕，生何首乌的乙醇提取液对小鼠有急性毒性作用，但水提液无毒。因此，我们采用95%乙醇渗漉液(1∶8)〔4〕，按文献〔2〕法，以0.35ml/kg 1次灌胃给药，对小鼠进行急性毒性试验，观察7天。
, 百拇医药
结果：用药量280g/kg.按文献公式〔2〕计算，相当于人临床用量30g/50kg的466倍(临床常用量为9～15g)。两组小鼠均未见死亡，也未见腹泻、精神不振等异常。
3 讨 论
本实验结果表明，12h煮制品各项指标均不如32h蒸制品；其中12h煮制品不仅没有免疫增强作用，反而有免疫抑制作用，对记忆障碍亦有增强的趋势。其主要原因可能在于炮制时间不够，其炮制过程是否还有其他因素影响，尚有待进一步查明。而蒸32h是否为最佳的炮制条件(炮制温度、炮制时间、辅料等)有待于进一步研究。
谢沛珊老师协助部分实验，谨致谢忱。
参考文献
[1] 叶定江，朱 荃，祁辉林，等.何首乌及其炮制品的免疫药理学研究.中药通报，1987，12(3)∶149.
[2] 陈 奇.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出版社，1993.33～34，118～119，738～740，892～894.
[3] 北京医学院微生物学教研室.实验免疫学.北京：人民卫生出版社，1980.453.
[4] 沈道修，顾月芳，任晓瑛.何首乌炮制的药理研究.中成药，1982，1(1)∶21.
(1999-01-20收稿), http://www.100md.com