薄层扫描法测定强力免疫胶囊中人参皂苷 Re 的含量
作者：项金祥 洪天德 南淑华 关斌
单位：厦门中药厂(361009)
关键词：
中草药991213 强力免疫胶囊由人参、灵芝、虫草等多味药组成，有很强的增强免疫功能作用。我们选用薄层扫描法可单独测定主药人参中人参皂苷 Re 的含量，结果准确可靠，可作为控制本品质量的指标。
1 仪器与试药
岛津 CS-910 双波长薄层扫描仪；C-EIB 型色谱数据处理机；硅胶 G(青岛海洋化工厂)，人参皂苷 Re (中国药品生物制品检定所)；其它试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 薄层层析及扫描条件：薄层层析：0.1%羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 G 板，厚度 0.5 mm，110 ℃ 活化 30 min。展开剂：氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)下层液，10 ℃以下展开，展距 13 cm。显色剂：10% 硫酸乙醇溶液，105 ℃ 加热至斑点清晰。单波长直线扫描，Sx=3。
, 百拇医药
最大吸收波长选择：取样品供试液，人参皂苷 Re 对照品液及阴性对照液，点样于同一薄层板上，以上述实验条件展开，显色。对人参皂苷 Re 的相应斑点从 200～700 nm 进行扫描，得人参皂苷 Re 的最大吸收波长为 520 nm，阴性对照液无干扰。
2.2 标准曲线的绘制：精密称取适量人参皂苷 Re 对照品，用甲醇制成 1 mg/mL 对照品溶液。精密吸取1，2，3，4，5 μL 分别点于同一薄层板上 10 ℃ 以下展开，取出晾干，测定得出人参皂苷 Re 斑点的积分值与点样量的回归方程式为：Y=1.7122×10-4X-0.1672。结果表明，人参皂苷 Re 点样量在1～5 μg范围内与峰面积积分值呈直线关系，r=0.9988。
2.3 稳定性试验：展开后的薄层板，每隔30 min测定斑点面积的积分值，直至3 h，RSD 为3.54%，表明，3 h内稳定。
, http://www.100md.com 2.4 精密度试验：同一斑点连续重复扫描测定5次，各次测定峰面积，RSD=1.15%。同一板与不同板上点同一样品，点样量相同，展开，测定结果，RSD=3.96%(n=5)。
2.5 样品测定：取本品内容物 1.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密量取加水饱和的正丁醇 25 mL 浸过夜，超声 30 min，冷却，滤过。精密吸取滤液 10 mL，置分液漏斗中，用5%碳酸氢钠水溶液洗4次，弃去水液，再用正丁醇饱和的水 10 mL 洗1次，弃去水液。取正丁醇液置水浴蒸干，残留物加水约 4 mL 使溶解，定量转移到 D101 大孔吸附树脂柱(0.9 cm×9 cm)上，先用 20 mL 水洗涤，再用70%乙醇 30 mL 洗脱，收集醇洗脱液置水浴上蒸干，残留物加甲醇 1 mL 定容，作为供试品溶液。吸取供试品溶液 5～7 μL，对照品溶液 2 μL、3 μL，分别点于同一薄层板上，10 ℃ 以下展开，显色，测定，结果见表1。
表1 样品含量测定结果 批号
, http://www.100md.com
人参皂苷 Re 含量(%)
RSD
(%，n=3)
970701
0.1189
3.12
970902
0.1155
3.40
971103
0.1124
2.06
, http://www.100md.com 980101
0.1296
1.95
980303
0.1310
1.87
2.6 回收率测定：取同一批已知含量的样品，测得 Re 平均回收率为 95.6%，RSD 为0.92%(n=5)。
3 小结
3.1 本品所含皂苷成分复杂，干扰较大，我们采用大孔吸附树脂分离，除去杂质干扰，方法简单，收到较好的效果。
3.2 本法薄层色谱宜在 10 ℃ 以下展开，可提高方法的准确性和重现性。
收稿日期：1999-02-30, http://www.100md.com
单位：厦门中药厂(361009)
关键词：
中草药991213 强力免疫胶囊由人参、灵芝、虫草等多味药组成，有很强的增强免疫功能作用。我们选用薄层扫描法可单独测定主药人参中人参皂苷 Re 的含量，结果准确可靠，可作为控制本品质量的指标。
1 仪器与试药
岛津 CS-910 双波长薄层扫描仪；C-EIB 型色谱数据处理机；硅胶 G(青岛海洋化工厂)，人参皂苷 Re (中国药品生物制品检定所)；其它试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 薄层层析及扫描条件：薄层层析：0.1%羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 G 板，厚度 0.5 mm，110 ℃ 活化 30 min。展开剂：氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)下层液，10 ℃以下展开，展距 13 cm。显色剂：10% 硫酸乙醇溶液，105 ℃ 加热至斑点清晰。单波长直线扫描，Sx=3。
, 百拇医药
最大吸收波长选择：取样品供试液，人参皂苷 Re 对照品液及阴性对照液，点样于同一薄层板上，以上述实验条件展开，显色。对人参皂苷 Re 的相应斑点从 200～700 nm 进行扫描，得人参皂苷 Re 的最大吸收波长为 520 nm，阴性对照液无干扰。
2.2 标准曲线的绘制：精密称取适量人参皂苷 Re 对照品，用甲醇制成 1 mg/mL 对照品溶液。精密吸取1，2，3，4，5 μL 分别点于同一薄层板上 10 ℃ 以下展开，取出晾干，测定得出人参皂苷 Re 斑点的积分值与点样量的回归方程式为：Y=1.7122×10-4X-0.1672。结果表明，人参皂苷 Re 点样量在1～5 μg范围内与峰面积积分值呈直线关系，r=0.9988。
2.3 稳定性试验：展开后的薄层板，每隔30 min测定斑点面积的积分值，直至3 h，RSD 为3.54%，表明，3 h内稳定。
, http://www.100md.com 2.4 精密度试验：同一斑点连续重复扫描测定5次，各次测定峰面积，RSD=1.15%。同一板与不同板上点同一样品，点样量相同，展开，测定结果，RSD=3.96%(n=5)。
2.5 样品测定：取本品内容物 1.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密量取加水饱和的正丁醇 25 mL 浸过夜，超声 30 min，冷却，滤过。精密吸取滤液 10 mL，置分液漏斗中，用5%碳酸氢钠水溶液洗4次，弃去水液，再用正丁醇饱和的水 10 mL 洗1次，弃去水液。取正丁醇液置水浴蒸干，残留物加水约 4 mL 使溶解，定量转移到 D101 大孔吸附树脂柱(0.9 cm×9 cm)上，先用 20 mL 水洗涤，再用70%乙醇 30 mL 洗脱，收集醇洗脱液置水浴上蒸干，残留物加甲醇 1 mL 定容，作为供试品溶液。吸取供试品溶液 5～7 μL，对照品溶液 2 μL、3 μL，分别点于同一薄层板上，10 ℃ 以下展开，显色，测定，结果见表1。
表1 样品含量测定结果 批号
, http://www.100md.com
人参皂苷 Re 含量(%)
RSD
(%，n=3)
970701
0.1189
3.12
970902
0.1155
3.40
971103
0.1124
2.06
, http://www.100md.com 980101
0.1296
1.95
980303
0.1310
1.87
2.6 回收率测定：取同一批已知含量的样品，测得 Re 平均回收率为 95.6%，RSD 为0.92%(n=5)。
3 小结
3.1 本品所含皂苷成分复杂，干扰较大，我们采用大孔吸附树脂分离，除去杂质干扰，方法简单，收到较好的效果。
3.2 本法薄层色谱宜在 10 ℃ 以下展开，可提高方法的准确性和重现性。
收稿日期：1999-02-30, http://www.100md.com