肉苁蓉总苷对大鼠心肌缺血的保护作用
作者：毛新民 王晓雯 李琳琳 王雪飞
单位：新疆医科大学基础部药理教研室(乌鲁木齐830054)
关键词：肉苁蓉总苷；结扎冠脉；心肌缺血
中草药/990219摘 要 采用结扎冠状动脉造成大鼠心肌缺血模型，研究了肉苁蓉总苷(GC)对缺血心肌的保护作用。结扎冠状动脉后，心肌中SOD、CPK活性降低，MDA含量升高，心电图表现为S-T段升高，大鼠静脉给予GC，5 min后再结扎冠脉，结果GC能明显改善缺血心电图，减小心肌梗死面积，提高心肌组织中的CPK活力，但对SOD和MDA无显著影响，提示GC具有保护缺血心肌作用。
肉苁蓉又名大芸，是一传统中药，具有补中益气、补肾益精等功效。据文献报道肉苁蓉可增强机体免疫力〔1〕、延缓衰老〔2〕等作用；李巧茹〔3〕等发现其粗制剂可增加小鼠红细胞SOD活性，降低心肌脂褐质含量。肉苁蓉总苷(glycosides of cistanche, GC)对异丙肾上腺素诱发的小鼠急性心肌缺血有保护作用〔4〕，并具有抗脂质过氧化和抗幅射作用〔5〕。本文旨在研究GC对结扎大鼠冠脉所致心肌缺血的影响。
, 百拇医药
1 材料
1.1 药品与试剂：肉苁蓉总苷由新疆医学院药学系植物化学室按日本文献(公开特许公报(A)昭63-198627)方法，从北疆产盐生肉苁蓉中提得，主要成分是苯乙醇苷类。三氯甲烷为分析纯，邻苯三酚、硫化巴比妥酸。复方丹参注射液为上海第一制药厂产品，2 mL注射液，批号：951101。
1.2 动物：Wistar种大鼠，体重(250±50) g，雌雄兼用，新疆医学院动物室提供。
1.3 仪器：LMS-2B型二道生理记录仪(成都仪器厂)，DH-1型动物人工呼吸机(浙江医科大学医疗仪器实验厂)，LYJ-Ⅲ型离心沉淀机(江苏响水医疗器械厂)，721分光光度计(上海第三分析仪器厂)。
2 方法
2.1 实验方法：成年Wistar大鼠40只，随机分为5组，第1组为缺血组，第2组为假手术组，第3组为GC大剂量组(250 mg/kg)，第4组为GC小剂量组(125 mg/kg)，第5组为丹参组，第1、2组iv生理盐水(NS)1 mL/kg；第3、4组iv GC,第5组iv复方丹参注射液0.6 mL/kg(相当于丹参和降香各0.6 g)。用20%乌拉坦腹腔麻醉大鼠(0.5 mL/100 g)，于药后5 min，在左锁骨中线纵行切开皮肤约2 cm，在第四和第五肋间打开胸腔，剪开心包，在动脉圆锥与左心耳之间结扎左冠状动脉后(假手术组仅穿线不结扎)，迅速关闭胸腔。术前及术后120 min分别记录大鼠胸前心电图(ECG)，测量S-T段变化。术后2 h摘取大鼠心脏，用冰NS洗尽残血；用滤纸吸干，称重，取心尖组织0.1 g迅速冰冻，将左心室切成1～2 mm厚的薄片，用0.1%氯化硝基四氮唑蓝(NBT)染色15 min(37℃±0.5℃)，取出后剪下未被染色的心肌梗死区，用滤纸吸干，称重，计算梗死心肌占全心重的百分率。用0.9%NS制备心肌匀浆，测定心肌匀浆中的磷酸肌酸激酶(CPK)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。
, 百拇医药
2.2 生化指标的测定：SOD活性用邻苯三酚自氧化法测定。MDA含量用TBA显色法测定。CPK活性用肌酸量测定法。
2.3 统计学处理：所有数据均以
±s形式表示，各项指标比较采用组间t检验。
3 结果
3.1 GC对缺血ECG S-T段和心肌梗死面积的影响：缺血组ECG S-T段抬高(0.96±0.40) mV，梗死面积为17.01%±3.16%。GC大、小剂量组和丹参组与缺血组比较，ECG S-T段分别降低53.1%、14.6%和40.6%；梗死面积分别减少24.5%、17.2%和22.3%，GC大剂量组和丹参组与缺血组比较具有显著性差异(P<0.05)，但GC小剂量组与缺血组比较无显著性差异(表1)。
表1 对缺血ECG S-T段和心肌梗死面积的影响 组别
, 百拇医药
剂量(mg/kg)
动物
(只)
S-T段抬高
(mV)
梗死面积
(%)
1
—
8
0.96±0.40
17.01±3.16
2
, http://www.100md.com
—
8
0.03±0.01**
0
3
250
8
0.45±0.26*
12.85±2.74*
4
125
8
, 百拇医药
0.82±0.43
14.09±1.53
5
0.6 mL/kg
8
0.57±0.31*
13.21±3.52*
与第1组(缺血组)比较：*P<0.05 **P<0.01
3.2 GC对缺血心肌SOD、MDA和CPK的影响：缺血心肌SOD和CPK活性与假手术组比分别降低25.5%和48.7%，MDA则增加121.4%。GC大剂量组和丹参组与缺血组比较CPK活性分别增加56.7%和65.2%，但两组对缺血所致SOD活性降低和MDA含量增高均无显著影响(表2)。
, 百拇医药
表2 对缺血心肌SOD、MDA和CPK的影响 组别
剂量(mg/kg)
动物
(只)
SOD
(U/mg蛋白)
MDA
(nmol/mg蛋白)
CPK
(U/mg蛋白)
1
—
, 百拇医药
8
6.88±0.71
0.31±0.11
14.1±7.14
2
—
8
9.24±1.84**
0.14±0.02**
27.5±3.99**
3
250
, 百拇医药
8
6.65±1.37
0.21±0.08
22.1±7.03*
4
125
8
6.13±1.24
0.27±0.07
18.1±7.63
5
0.6 mL/kg
, 百拇医药
8
6.57±1.79
0.23±0.10
23.3±5.19*
与第1组(缺血组)比较：*P<0.05 **P<0.01
4 讨论
结扎动物冠脉，使其支配区域心肌严重缺血，氧自由基(OFR)生成增多，而清除OFR的酶(如SOD等)活性降低，造成OFR堆积，OFR与细胞膜磷脂中的不饱和脂肪酸形成脂质过氧化物，使膜的结构和功能受到破坏，通透性增加，完整性丧失，钙离子大量涌入，细胞内钙超负荷，后者又可促进OFR的产生，形成恶性循环。
本室以往研究资料表明，GC可提高缺血再灌注心肌SOD和硒谷胱甘肽过氧化物酶的活性，降低MDA含量，减轻心肌超微结构损伤。本实验结果也表明，GC大剂量(250 mg/kg)组可降低结扎冠脉所致心电图S-T段抬高幅度，减小梗死面积，增加心肌匀浆CPK活性，进一步证实GC对缺血心肌有保护作用。而GC小剂量(125 mg/kg)组则无效；GC 2个剂量组和丹参组对SOD和MDA无显著影响，这可能与给药次数(本实验采用舌静脉一次给药)有关。
, 百拇医药
*Address:Mao Xinmin,Department of Pharmacology,XinjinanUniersity of Medical Seiences ,Wulumuqi
作者简介：毛新民 男37岁，1984年获医学学士学位。现为新疆医科大学药理室副主任，副教授，硕士生导师。曾于1994年赴法国留学一年，从事《寻找并鉴别新的微管蛋白》的研究工作。现主要从事心血管药理和中药民族药的研究，1993年获新疆维吾尔自治区科技进步二等奖，1996年获国家级成果奖，并于1996年和1998年连续两届荣获新疆医科大学优秀科技工作者称号。
参考文献
[1] 高海谦.中成药研究，1984，(11)：34
[2] 项 平，等.辽宁中医杂志，1982，(3)：4
[3] 李巧茹，等.上海中医药杂志，1990，(11)：22
[4] 王晓雯，等.全国第五届心血管药理学术大会.上海.1994.A23
[5] 李琳琳，等.中国中药杂志，1997，22(6)：364
(1998-03-23 收稿), http://www.100md.com
单位：新疆医科大学基础部药理教研室(乌鲁木齐830054)
关键词：肉苁蓉总苷；结扎冠脉；心肌缺血
中草药/990219摘 要 采用结扎冠状动脉造成大鼠心肌缺血模型，研究了肉苁蓉总苷(GC)对缺血心肌的保护作用。结扎冠状动脉后，心肌中SOD、CPK活性降低，MDA含量升高，心电图表现为S-T段升高，大鼠静脉给予GC，5 min后再结扎冠脉，结果GC能明显改善缺血心电图，减小心肌梗死面积，提高心肌组织中的CPK活力，但对SOD和MDA无显著影响，提示GC具有保护缺血心肌作用。
肉苁蓉又名大芸，是一传统中药，具有补中益气、补肾益精等功效。据文献报道肉苁蓉可增强机体免疫力〔1〕、延缓衰老〔2〕等作用；李巧茹〔3〕等发现其粗制剂可增加小鼠红细胞SOD活性，降低心肌脂褐质含量。肉苁蓉总苷(glycosides of cistanche, GC)对异丙肾上腺素诱发的小鼠急性心肌缺血有保护作用〔4〕，并具有抗脂质过氧化和抗幅射作用〔5〕。本文旨在研究GC对结扎大鼠冠脉所致心肌缺血的影响。
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1 材料
1.1 药品与试剂：肉苁蓉总苷由新疆医学院药学系植物化学室按日本文献(公开特许公报(A)昭63-198627)方法，从北疆产盐生肉苁蓉中提得，主要成分是苯乙醇苷类。三氯甲烷为分析纯，邻苯三酚、硫化巴比妥酸。复方丹参注射液为上海第一制药厂产品，2 mL注射液，批号：951101。
1.2 动物：Wistar种大鼠，体重(250±50) g，雌雄兼用，新疆医学院动物室提供。
1.3 仪器：LMS-2B型二道生理记录仪(成都仪器厂)，DH-1型动物人工呼吸机(浙江医科大学医疗仪器实验厂)，LYJ-Ⅲ型离心沉淀机(江苏响水医疗器械厂)，721分光光度计(上海第三分析仪器厂)。
2 方法
2.1 实验方法：成年Wistar大鼠40只，随机分为5组，第1组为缺血组，第2组为假手术组，第3组为GC大剂量组(250 mg/kg)，第4组为GC小剂量组(125 mg/kg)，第5组为丹参组，第1、2组iv生理盐水(NS)1 mL/kg；第3、4组iv GC,第5组iv复方丹参注射液0.6 mL/kg(相当于丹参和降香各0.6 g)。用20%乌拉坦腹腔麻醉大鼠(0.5 mL/100 g)，于药后5 min，在左锁骨中线纵行切开皮肤约2 cm，在第四和第五肋间打开胸腔，剪开心包，在动脉圆锥与左心耳之间结扎左冠状动脉后(假手术组仅穿线不结扎)，迅速关闭胸腔。术前及术后120 min分别记录大鼠胸前心电图(ECG)，测量S-T段变化。术后2 h摘取大鼠心脏，用冰NS洗尽残血；用滤纸吸干，称重，取心尖组织0.1 g迅速冰冻，将左心室切成1～2 mm厚的薄片，用0.1%氯化硝基四氮唑蓝(NBT)染色15 min(37℃±0.5℃)，取出后剪下未被染色的心肌梗死区，用滤纸吸干，称重，计算梗死心肌占全心重的百分率。用0.9%NS制备心肌匀浆，测定心肌匀浆中的磷酸肌酸激酶(CPK)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。
, 百拇医药
2.2 生化指标的测定：SOD活性用邻苯三酚自氧化法测定。MDA含量用TBA显色法测定。CPK活性用肌酸量测定法。
2.3 统计学处理：所有数据均以
±s形式表示，各项指标比较采用组间t检验。3 结果
3.1 GC对缺血ECG S-T段和心肌梗死面积的影响：缺血组ECG S-T段抬高(0.96±0.40) mV，梗死面积为17.01%±3.16%。GC大、小剂量组和丹参组与缺血组比较，ECG S-T段分别降低53.1%、14.6%和40.6%；梗死面积分别减少24.5%、17.2%和22.3%，GC大剂量组和丹参组与缺血组比较具有显著性差异(P<0.05)，但GC小剂量组与缺血组比较无显著性差异(表1)。
表1 对缺血ECG S-T段和心肌梗死面积的影响 组别
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剂量(mg/kg)
动物
(只)
S-T段抬高
(mV)
梗死面积
(%)
1
—
8
0.96±0.40
17.01±3.16
2
, http://www.100md.com
—
8
0.03±0.01**
0
3
250
8
0.45±0.26*
12.85±2.74*
4
125
8
, 百拇医药
0.82±0.43
14.09±1.53
5
0.6 mL/kg
8
0.57±0.31*
13.21±3.52*
与第1组(缺血组)比较：*P<0.05 **P<0.01
3.2 GC对缺血心肌SOD、MDA和CPK的影响：缺血心肌SOD和CPK活性与假手术组比分别降低25.5%和48.7%，MDA则增加121.4%。GC大剂量组和丹参组与缺血组比较CPK活性分别增加56.7%和65.2%，但两组对缺血所致SOD活性降低和MDA含量增高均无显著影响(表2)。
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表2 对缺血心肌SOD、MDA和CPK的影响 组别
剂量(mg/kg)
动物
(只)
SOD
(U/mg蛋白)
MDA
(nmol/mg蛋白)
CPK
(U/mg蛋白)
1
—
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8
6.88±0.71
0.31±0.11
14.1±7.14
2
—
8
9.24±1.84**
0.14±0.02**
27.5±3.99**
3
250
, 百拇医药
8
6.65±1.37
0.21±0.08
22.1±7.03*
4
125
8
6.13±1.24
0.27±0.07
18.1±7.63
5
0.6 mL/kg
, 百拇医药
8
6.57±1.79
0.23±0.10
23.3±5.19*
与第1组(缺血组)比较：*P<0.05 **P<0.01
4 讨论
结扎动物冠脉，使其支配区域心肌严重缺血，氧自由基(OFR)生成增多，而清除OFR的酶(如SOD等)活性降低，造成OFR堆积，OFR与细胞膜磷脂中的不饱和脂肪酸形成脂质过氧化物，使膜的结构和功能受到破坏，通透性增加，完整性丧失，钙离子大量涌入，细胞内钙超负荷，后者又可促进OFR的产生，形成恶性循环。
本室以往研究资料表明，GC可提高缺血再灌注心肌SOD和硒谷胱甘肽过氧化物酶的活性，降低MDA含量，减轻心肌超微结构损伤。本实验结果也表明，GC大剂量(250 mg/kg)组可降低结扎冠脉所致心电图S-T段抬高幅度，减小梗死面积，增加心肌匀浆CPK活性，进一步证实GC对缺血心肌有保护作用。而GC小剂量(125 mg/kg)组则无效；GC 2个剂量组和丹参组对SOD和MDA无显著影响，这可能与给药次数(本实验采用舌静脉一次给药)有关。
, 百拇医药
*Address:Mao Xinmin,Department of Pharmacology,XinjinanUniersity of Medical Seiences ,Wulumuqi
作者简介：毛新民 男37岁，1984年获医学学士学位。现为新疆医科大学药理室副主任，副教授，硕士生导师。曾于1994年赴法国留学一年，从事《寻找并鉴别新的微管蛋白》的研究工作。现主要从事心血管药理和中药民族药的研究，1993年获新疆维吾尔自治区科技进步二等奖，1996年获国家级成果奖，并于1996年和1998年连续两届荣获新疆医科大学优秀科技工作者称号。
参考文献
[1] 高海谦.中成药研究，1984，(11)：34
[2] 项 平，等.辽宁中医杂志，1982，(3)：4
[3] 李巧茹，等.上海中医药杂志，1990，(11)：22
[4] 王晓雯，等.全国第五届心血管药理学术大会.上海.1994.A23
[5] 李琳琳，等.中国中药杂志，1997，22(6)：364
(1998-03-23 收稿), http://www.100md.com