肉座菌科三种药用真菌的化学成分分析比较△
作者：李聪 汪汉卿 谢金伦 林南英 代万华 陈远腾
单位：李聪 汪汉卿(中国科学院兰州化学物理研究所730000)；谢金伦 林南英 代万华(云南大学发酵工作重点实验室)；陈远腾(云南大学实验中心)
关键词：竹红菌；竹黄菌；菌寄生菌
中草药000405摘 要 报道了肉座菌科3 种药用真菌竹黄菌Shiraia bambusiicola，竹红菌Hypocrella bambusaw及菌寄生菌Hypomyces (Fr.) Tul. sp. 的化学成分分析的比较。
竹红菌[1]主要分布在我国云南省西北和西藏东南部。竹黄[2，3]主要分布在浙江、江苏、贵州等省。民间用于治疗胃病、风湿关节炎、临床治疗外阴白色病变[4]、软化疤痕疙瘩[5]。近年来受到广泛的研究与关注[6]，其醌化合物不但有希望发展成为新型的抗肿瘤、抑制艾滋病病毒(HIV)的光疗药物[7，8]，而且还是潜在的新型光电转换材料[9]。陈远腾等人先后从这2个天然真菌中分离到竹红菌甲素[10]、竹红菌乙素、甘露醇和脂肪酸。我们从云南西部山区筛选到一株丝状真菌，经人工培养可在实验室批量制备该真菌[11]，菌种经鉴定为：子囊菌纲，肉座菌科，菌寄生菌属的真菌Hypomyces (Fr.) Tul. sp. (以下暂定为菌寄生菌)。对2 种野生真菌和人工实验室培养的真菌体的主要成分进行分析比较，以利于人工培养真菌的开发利用。从人工培养真菌得到醌化合物国内外未见报道。
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1 材料与方法
从云南丽江地区收集到竹红菌子座，经鉴定为Hypocrella bambusaw B. et Br. sacc. 从浙江天目山收集到的竹黄子座经鉴定为Shiraia bambusiicola P. Henn. 从云南西部山区筛选到的真菌实验室制备的菌寄生菌体经鉴定为Hypomyces (Fr) Ful. sp.，上述材料经生物学家杨发蓉先生和陈远腾先生鉴定。
1.1 氨基酸分析：分别称取3 种真菌各10 mg，放置于试管中，把试管放置于样品水解瓶中，加入6 mol/L HCl 0.5 mL，加热水解24 h后充氮保存。用Waters pico-TagTM氨基酸分析仪测定。分析柱pico-TagTM HAA. Column (15 cm×3.9 mm)，衍生方式：PITC柱前衍生(异硫氰酸苯酯)，柱温38 ℃，检测器UV，λ254 nm。采用双泵梯度洗脱。Waters 810色谱工作站，收集并处理数据，外标法定量(表1)。
, 百拇医药
1.2 薄层色谱比较分析：分别取3 种真菌各2 g，用CHCl3提取，提取液分别放置于刻度试管中，在水浴锅上加热浓缩到0.3 mL，用青岛海洋化工厂生产的硅胶H板点样展开，点样量2 mL，展开剂氯仿-甲醇(70∶1)得到薄层展开(图1)。
1.3 甘露醇的分离和定量：参照文献[3]把竹红菌、竹黄、人工培养菌寄生菌各取10 g，用95%乙醇为溶剂在索氏提取器上加热回流4 h。把所得提取液分别浓缩后静置折出结晶，倾去并过滤上清液，得粗品。粗品分别加蒸馏水溶解后，加活性炭加热搅拌脱色，过滤，在水浴锅上浓缩后分别加95%乙醇重结晶，得到甘露醇纯品。竹红菌、竹黄中甘露醇的结构鉴定见文献[12]。
1-菌寄生菌 2-竹红菌
3-竹黄 4-竹红菌甲素标样
, 百拇医药
图1 3 种真菌的TLC图谱
1.4 脂肪酸的分析比较：我们从菌寄生菌中用丙酮提取、浓缩，通过硅胶柱层析，分到一个蓝色荧光斑点。用美国惠普HP 6890型GC-MS仪分析，柱子HP 5 MS 30 m×0.25 mm×0.25 μm，程序升温，3 min时升温到50 ℃，5 min时升温到150 ℃。8 min时升温到250 ℃，维持此温度分析25 min，进样量0.5 μL，分离鉴定蓝色荧光斑点组分。
1.5 醌类化学成分分离鉴定比较：文献[2～4]分离并鉴定了竹红菌、竹黄中的竹红菌甲素和竹红菌乙素。我们从菌寄生菌中分离到并鉴定了竹红菌甲素、痂囊腔菌素。取菌寄生菌属(人工培养)真菌464 g用丙酮提取，回收丙酮得16.0 g暗红色糊状物。用700 g青岛海洋化工厂层析硅胶装柱(湿法装柱)，用氯仿-乙酸乙酯冲洗柱子，分别得到暗红色结晶和深红色结晶，经鉴定分别为竹红菌甲素和痂囊腔菌素A[12]。竹红菌甲素、乙素和痂囊腔菌素A的化学结构式见图2。
, 百拇医药
图2 主要
醌类化合物的化学结构式
2 结果
根据文献，张曼华等人从竹红菌中经旋转薄层仪和气相色谱-质谱联用仪鉴定了十六碳酸、十七碳酸、十八碳烯酸、十八碳烯醛。王景祥等人[3]从竹黄中分离到硬脂酸(十八烷酸)。菌寄生菌中的主要脂肪酸经鉴定是十六碳酸、十六碳烷、十七碳醇-1、十七碳烷、十八碳二烯酸-9，11、十八碳二烯酸-9，12、十八烷烯-1。3 种真菌中氨基酸、甘露醇、醌化合物的含量分别见表1～3。
表1 3 种真菌的氨基酸分析(mg/100 g) 缩写
名称
菌寄生菌
, http://www.100md.com
竹红菌
竹黄
Asp
天门冬氨酸
28.13
4.62
Glu
谷氨酸
119.08
3.88
8.77
Ser
丝氨酸
, 百拇医药
60.44
7.01
14.71
Gly
甘氨酸
66.91
15.83
21.02
Thr
苏氨酸
45.00
8.18
Ala
, http://www.100md.com
丙氨酸
51.11
Pro
脯氨酸
16.09
31.17
Tyr
酪氨酸
144.63
226.85
295.28
Val
缬氨酸
, 百拇医药
116.54
Ile
异亮氨酸
53.92
Met
蛋氨酸
13.93
注：在氨基酸分析中仅取含量相对高的氨基酸，做定量分析，其它氨基酸含量相对少，未作定量。表2 3 种真菌的甘露醇含量 名称
样品(g)
甘露醇重(g)
百分含量(%)
, http://www.100md.com 竹红菌
10
0.4
4
竹黄
10
0.15
1.5
菌寄生菌
10
0.5
5
表3 3 种真菌醌化合物含量 真菌名称
, 百拇医药
化合物
含量(%)
竹红菌
竹红菌甲素 竹红菌乙素
3.9
竹黄
竹红菌甲素 竹红菌乙素
0.4
菌寄生菌
竹红菌甲素 痂囊腔菌素
0.2
D-甘露醇的分析鉴定：人工发酵菌寄生菌经烘箱烘干50 g，按前述方法获得2.5 g，mp 166 ℃～167 ℃，元素分析PC-2400 有机元素分析仪测定C 39.73%，H 7.65%。IR、1H，13CNMR光谱与文献[12]的D-甘露醇一致。
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3 讨论
前述图表和数据比较了3 株真菌的主要化学成分，3 株真菌同是肉座菌科不同属的真菌，主要化学成分基本一致，随属种不同也有化学成分差别。主要成分为差别也验证了这3 种真菌的分类学意义。其特征化合物主要为脂肪酸、甘露醇和竹红菌甲素。特别是竹红菌甲素在真菌中仅见于这3 种真菌，前2 株菌(竹红菌、竹黄)已经有多位学者的研究证明，在真菌中也仅见于国内的报道。利用固体发酵法培养真菌从而得到光敏色素醌类化合物，可以工厂化生产醌化合物，为醌化合物在医药开发方面提供了良好的前景。
云南省发工程重点实验室开放基金资助
参考文献
1，万象义，等.科学通报，1980，(24)：1148
2，陈远腾，等.云南大学学报，1981，(2)：104
, 百拇医药
3，王景祥，等.中草药，1990，21(7)：292
4，于兰馥，等.中华妇产科杂志，1984，19(1)：29
5，梁睿媛，等.中华皮肤科杂志，1982，15(2)：87
6，蒋丽金.科学通报，1990，35(21)：1608
7，Diwu Z. Photochemistry and Photobiology,1995,61(6):592
8，Hudson J D, et al. Photochemistry and Photobiology,1997,65(2):352
9，张红雨.生物化学与生物物理学报，1998，30(3)：272
10，Chen Weishin，et al. 科学通报,1981:1040
11，李 聪.第四届中日国际真菌学术会议论文集.1998：167
12，李 聪，等.热带作物学报(增刊)：1998，19：44
(1999-04-13收稿), 百拇医药
单位：李聪 汪汉卿(中国科学院兰州化学物理研究所730000)；谢金伦 林南英 代万华(云南大学发酵工作重点实验室)；陈远腾(云南大学实验中心)
关键词：竹红菌；竹黄菌；菌寄生菌
中草药000405摘 要 报道了肉座菌科3 种药用真菌竹黄菌Shiraia bambusiicola，竹红菌Hypocrella bambusaw及菌寄生菌Hypomyces (Fr.) Tul. sp. 的化学成分分析的比较。
竹红菌[1]主要分布在我国云南省西北和西藏东南部。竹黄[2，3]主要分布在浙江、江苏、贵州等省。民间用于治疗胃病、风湿关节炎、临床治疗外阴白色病变[4]、软化疤痕疙瘩[5]。近年来受到广泛的研究与关注[6]，其醌化合物不但有希望发展成为新型的抗肿瘤、抑制艾滋病病毒(HIV)的光疗药物[7，8]，而且还是潜在的新型光电转换材料[9]。陈远腾等人先后从这2个天然真菌中分离到竹红菌甲素[10]、竹红菌乙素、甘露醇和脂肪酸。我们从云南西部山区筛选到一株丝状真菌，经人工培养可在实验室批量制备该真菌[11]，菌种经鉴定为：子囊菌纲，肉座菌科，菌寄生菌属的真菌Hypomyces (Fr.) Tul. sp. (以下暂定为菌寄生菌)。对2 种野生真菌和人工实验室培养的真菌体的主要成分进行分析比较，以利于人工培养真菌的开发利用。从人工培养真菌得到醌化合物国内外未见报道。
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1 材料与方法
从云南丽江地区收集到竹红菌子座，经鉴定为Hypocrella bambusaw B. et Br. sacc. 从浙江天目山收集到的竹黄子座经鉴定为Shiraia bambusiicola P. Henn. 从云南西部山区筛选到的真菌实验室制备的菌寄生菌体经鉴定为Hypomyces (Fr) Ful. sp.，上述材料经生物学家杨发蓉先生和陈远腾先生鉴定。
1.1 氨基酸分析：分别称取3 种真菌各10 mg，放置于试管中，把试管放置于样品水解瓶中，加入6 mol/L HCl 0.5 mL，加热水解24 h后充氮保存。用Waters pico-TagTM氨基酸分析仪测定。分析柱pico-TagTM HAA. Column (15 cm×3.9 mm)，衍生方式：PITC柱前衍生(异硫氰酸苯酯)，柱温38 ℃，检测器UV，λ254 nm。采用双泵梯度洗脱。Waters 810色谱工作站，收集并处理数据，外标法定量(表1)。
, 百拇医药
1.2 薄层色谱比较分析：分别取3 种真菌各2 g，用CHCl3提取，提取液分别放置于刻度试管中，在水浴锅上加热浓缩到0.3 mL，用青岛海洋化工厂生产的硅胶H板点样展开，点样量2 mL，展开剂氯仿-甲醇(70∶1)得到薄层展开(图1)。
1.3 甘露醇的分离和定量：参照文献[3]把竹红菌、竹黄、人工培养菌寄生菌各取10 g，用95%乙醇为溶剂在索氏提取器上加热回流4 h。把所得提取液分别浓缩后静置折出结晶，倾去并过滤上清液，得粗品。粗品分别加蒸馏水溶解后，加活性炭加热搅拌脱色，过滤，在水浴锅上浓缩后分别加95%乙醇重结晶，得到甘露醇纯品。竹红菌、竹黄中甘露醇的结构鉴定见文献[12]。
1-菌寄生菌 2-竹红菌
3-竹黄 4-竹红菌甲素标样
, 百拇医药
图1 3 种真菌的TLC图谱
1.4 脂肪酸的分析比较：我们从菌寄生菌中用丙酮提取、浓缩，通过硅胶柱层析，分到一个蓝色荧光斑点。用美国惠普HP 6890型GC-MS仪分析，柱子HP 5 MS 30 m×0.25 mm×0.25 μm，程序升温，3 min时升温到50 ℃，5 min时升温到150 ℃。8 min时升温到250 ℃，维持此温度分析25 min，进样量0.5 μL，分离鉴定蓝色荧光斑点组分。
1.5 醌类化学成分分离鉴定比较：文献[2～4]分离并鉴定了竹红菌、竹黄中的竹红菌甲素和竹红菌乙素。我们从菌寄生菌中分离到并鉴定了竹红菌甲素、痂囊腔菌素。取菌寄生菌属(人工培养)真菌464 g用丙酮提取，回收丙酮得16.0 g暗红色糊状物。用700 g青岛海洋化工厂层析硅胶装柱(湿法装柱)，用氯仿-乙酸乙酯冲洗柱子，分别得到暗红色结晶和深红色结晶，经鉴定分别为竹红菌甲素和痂囊腔菌素A[12]。竹红菌甲素、乙素和痂囊腔菌素A的化学结构式见图2。
, 百拇医药
图2 主要
醌类化合物的化学结构式2 结果
根据文献，张曼华等人从竹红菌中经旋转薄层仪和气相色谱-质谱联用仪鉴定了十六碳酸、十七碳酸、十八碳烯酸、十八碳烯醛。王景祥等人[3]从竹黄中分离到硬脂酸(十八烷酸)。菌寄生菌中的主要脂肪酸经鉴定是十六碳酸、十六碳烷、十七碳醇-1、十七碳烷、十八碳二烯酸-9，11、十八碳二烯酸-9，12、十八烷烯-1。3 种真菌中氨基酸、甘露醇、醌化合物的含量分别见表1～3。
表1 3 种真菌的氨基酸分析(mg/100 g) 缩写
名称
菌寄生菌
, http://www.100md.com
竹红菌
竹黄
Asp
天门冬氨酸
28.13
4.62
Glu
谷氨酸
119.08
3.88
8.77
Ser
丝氨酸
, 百拇医药
60.44
7.01
14.71
Gly
甘氨酸
66.91
15.83
21.02
Thr
苏氨酸
45.00
8.18
Ala
, http://www.100md.com
丙氨酸
51.11
Pro
脯氨酸
16.09
31.17
Tyr
酪氨酸
144.63
226.85
295.28
Val
缬氨酸
, 百拇医药
116.54
Ile
异亮氨酸
53.92
Met
蛋氨酸
13.93
注：在氨基酸分析中仅取含量相对高的氨基酸，做定量分析，其它氨基酸含量相对少，未作定量。表2 3 种真菌的甘露醇含量 名称
样品(g)
甘露醇重(g)
百分含量(%)
, http://www.100md.com 竹红菌
10
0.4
4
竹黄
10
0.15
1.5
菌寄生菌
10
0.5
5
表3 3 种真菌
醌化合物含量 真菌名称, 百拇医药
化合物
含量(%)
竹红菌
竹红菌甲素 竹红菌乙素
3.9
竹黄
竹红菌甲素 竹红菌乙素
0.4
菌寄生菌
竹红菌甲素 痂囊腔菌素
0.2
D-甘露醇的分析鉴定：人工发酵菌寄生菌经烘箱烘干50 g，按前述方法获得2.5 g，mp 166 ℃～167 ℃，元素分析PC-2400 有机元素分析仪测定C 39.73%，H 7.65%。IR、1H，13CNMR光谱与文献[12]的D-甘露醇一致。
, http://www.100md.com
3 讨论
前述图表和数据比较了3 株真菌的主要化学成分，3 株真菌同是肉座菌科不同属的真菌，主要化学成分基本一致，随属种不同也有化学成分差别。主要成分为差别也验证了这3 种真菌的分类学意义。其特征化合物主要为脂肪酸、甘露醇和竹红菌甲素。特别是竹红菌甲素在真菌中仅见于这3 种真菌，前2 株菌(竹红菌、竹黄)已经有多位学者的研究证明，在真菌中也仅见于国内的报道。利用固体发酵法培养真菌从而得到光敏色素醌类化合物，可以工厂化生产醌化合物，为醌化合物在医药开发方面提供了良好的前景。
云南省发工程重点实验室开放基金资助
参考文献
1，万象义，等.科学通报，1980，(24)：1148
2，陈远腾，等.云南大学学报，1981，(2)：104
, 百拇医药
3，王景祥，等.中草药，1990，21(7)：292
4，于兰馥，等.中华妇产科杂志，1984，19(1)：29
5，梁睿媛，等.中华皮肤科杂志，1982，15(2)：87
6，蒋丽金.科学通报，1990，35(21)：1608
7，Diwu Z. Photochemistry and Photobiology,1995,61(6):592
8，Hudson J D, et al. Photochemistry and Photobiology,1997,65(2):352
9，张红雨.生物化学与生物物理学报，1998，30(3)：272
10，Chen Weishin，et al. 科学通报,1981:1040
11，李 聪.第四届中日国际真菌学术会议论文集.1998：167
12，李 聪，等.热带作物学报(增刊)：1998，19：44
(1999-04-13收稿), 百拇医药