肾炎冲剂中黄芪甲甙含量测定
作者：芮春兰 王龙
单位：芮春兰(南京济民医院 210094)；王龙(博福(益普生)天津制药有限公司南京办事处，江苏 南京 210002)
关键词：肾炎冲剂；黄芪甲甙；薄层扫描
时珍国医国药000320 提要 本实验采用薄层扫描法测定了肾炎冲剂中黄芪甲甙的含量。方法简单，重现性良好。平均变异系数 CV=2.57%，平均回收率
=97.1%。
中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1008-0805(2000)03-0214-02
肾炎冲剂是南京济民医院临床用于治疗肾炎的有效制剂。具有服用方便，疗效显著等优点。主要由黄芪、小青草、甘草等成分组成。本实验研究了其中的主药黄芪的定性、定量，以控制药品的内在质量。
, 百拇医药
1 仪器、药品及试剂
1.1 仪器：Cs-930薄层扫描仪(日本岛津)，微量进样器(上海安亭微量进样器厂)，硅胶G板(自制，厚约0.2～0.3 mm，105℃活化1 h)，薄层色谱缸(北京玻璃缸厂)。
1.2 药品：均由南京市济民医院中药库房提供，由该院中药房主任顾宝新鉴定为正品，符合1990年版《中国药典》。
试剂：黄芪甲甙对照品(购于南京药物研究所，纯度99.2%)，其余所用试剂均为分析纯。
2 肾炎冲剂的制备：
2.1 水提取→醇沉→清膏
2.1.1 取雷公藤不去根皮的根，加水12倍量冷浸1 h后煮沸1 h，过滤。滤渣加水10倍量煮沸45 min，过滤。合并滤液浓缩至1∶1，加乙醇使含醇量达75%，冷藏36 h后抽滤，滤液回收乙醇至无醇味即得清膏A。
, 百拇医药
2.1.2 取小青草加水15倍量，冷浸1 h后煮沸1 h，过滤。滤渣加水12倍量，煮沸0.5 h后过滤，合并滤液，浓缩至1∶1。
2.1.3 取黄芪、甘草等余药加水12倍量，冷浸1 h后煮沸1 h，过滤。滤渣加水10倍量煮沸45 min，过滤。合并滤液再与2.1.2中所得滤液合并，浓缩至1∶1，加乙醇使含醇量达60%，冷浸36 h后抽滤，滤液回收乙醇到无醇味即得浸膏B。
2.2 冲剂的制备：合并清膏A+B，浓缩至相对密度1.25(60℃测)，加辅料制软材，14目筛挤压制粒，≤70℃干燥，12目筛整粒，分装(10 g/袋)即得。
3 黄芪甲甙的含量测定
3.1 实验条件：
层析条件：硅胶G板。
, http://www.100md.com
展开剂[3]：氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)，10℃以下放置取下层液。
显色剂[2]：10%硫酸乙醇液，喷雾显色。
显色条件[2]：105℃烘7 min，上盖玻板，胶布密封，30 min后扫描。
扫描条件[2]：单波长反射法锯齿扫描， λs=510 nm。狭逢1.25 mm×1.25 mm，线性参数 Sx=3。
3.2 对照品液与供试品液的制备
3.2.1 对照品液：精称105℃恒重3 h后的黄芪甲甙10.31 mg，以甲醇溶解并定溶于5 ml容量瓶中，此为对照品液，浓度为2.06 mg/ml。
, http://www.100md.com
3.2.2 样品液[3]：称取冲剂50.0 g(研细)，用水饱和的正丁醇提取5次(80，40，40，40，40 ml)，合并正丁醇液，用5% NaHCO3洗涤3次(20，20，20 ml)，再以水洗1次(20 ml)，弃水液，取正丁醇液于水浴上蒸干，用甲醇定容于2 ml容量瓶中取得。
3.2.3 阳性对照品液：取黄芪10 g，加水100 ml冷浸1 h后煮沸1 h，过滤。滤渣加水80 ml煮沸45 min，过滤，合并滤液浓缩1∶1，以水饱和正丁醇萃取5次(10，10，10，10，10 ml)，合并正丁醇液，以5%NaHCO3洗涤3次(10，10，10 ml)，再用水洗涤1次(10 ml)，取正丁醇液，水浴蒸干，以甲醇定容于2 ml容量瓶中即得。
3.2.4 阴性对照品液：按原工艺制备冲剂，缺少黄芪，其他药不变。按样品液提取方法提取。
, 百拇医药
3.3 薄层层析：精密吸取对照品液5 μl，样品液8 μl，阳性对照样液8 μl，阴性对照品液8 μl，点于同一板上，按上述条件，依上行法展开即得如下色谱图(见图1)。
图1
1.黄芪甲甙
2.样品液
3.阳性对照
4.阴性对照
3.4 线性关系：精密吸取对照品液1，2，3，4，5，6，7 μl点同一板上，依上述条件展开，显色，扫描，测得峰面积值，结果见表1。表明黄芪甲甙在1～5 μl之间浓度与峰面积是一条不过原点的直线(见图2)。回归方程是， Y=443.97 X+111 7.8， γ=0.998 24。
, http://www.100md.com
图2
表1 标准曲线扫描结果 点样量
峰面积值
点样量
峰面积值
1
212 0.3
2
283 0.34
3
389 0.7
4
471 5.4
, http://www.100md.com
5
575 0.61
6
630 9.7
7
656 3.58
3.5 稳定性：取对照品液5 μl点于薄层板上，展开，显色，扫描1次/30 min，取3.5 h测定结果，峰面积基本不变。见表2。 CV=1.12%， n=11。表2 稳定性扫描结果(n=11) 时间/h
面积
时间/h
面积
0.5
, http://www.100md.com
5 518.7
1
5 518.7
1.5
5 513.2
2
5 514.7
2.5
5 503.8
3
5 507.6
3.5
5 501.5
, 百拇医药
4
5 471.5
4.5
5 428.5
5
55 385.7
5.5
5 332.6
3.6 精密性实验：分别在2块板上点标准品液4 μl及样品液7 μl，各点6个点。依上法操作得扫描值。前者 CV=0.49%，后者 CV=2.9%。见表3、表4。 n=6。表3 标准品精密性扫描结果(n=6) 点样量
峰面积值
, http://www.100md.com
点样量
峰面积值
4
4 578.6
4
4 561.3
4
4 596.5
4
4 580.2
4
4 548.2
4
, http://www.100md.com
4 610.5
表4 样品精密性扫描结果 点样量
峰面积值
点样量
峰面积值
7
4 780.2
7
4 861.5
7
4 896.5
7
4 561.5
, http://www.100md.com
7
4 669.7
7
4 920.8
3.7 样品含量测定：取5批不同批号的冲剂50.0 g(研细)，按样品液制备方法制得样品液。在同一板上分别点上标准品液2个点，点样量为3，5 μl，同时点5批不同的样品液，点样量都是7 μl，按上述条件展开，显色，扫描得积分面积值，按外标两点法计算黄芪甲甙的含量，结果见表5。表5 肾炎冲剂中黄芪甲甙含量测定 批号
测定值/mg.g-1
CV
, 百拇医药
(%)
第1次
第2次
第3次
平均值
950307
0.035 1
0.036 1
0.036 5
0.035 9
2.01
950310
, http://www.100md.com
0.035 8
0.036 3
0.036 5
0.036 2
0.99
950312
0.035 1
0.034 6
0.035 0
0.034 9
0.035 4
0.76
, 百拇医药
2.57
950315
0.034 7
0.034 0
0.033 6
0.034 1
1.63
950317
0.035 8
0.036 4
0.036 1
0.036 1
, 百拇医药
0.83
3.8 加样回收实验：称取已知含量的冲剂50.0 g，准确加入定量的黄芪甲甙，按样品液制备方法提取，依上法测定，结果见表6。表6 加样回收实验结果(n=3) 批号
原有量/mg
加入量/mg
检出量/mg
回收率
(%)
CV
(%)
(%)
, http://www.100md.com
950307
1.795
2.83
4.518
96.1
0.34
950310
1.810
2.56
4.337
98.7
0.32
950312
, 百拇医药
1.745
2.19
3.879
97.3
0.57
97.16
950315
1.705
2.05
3.660
95.6
0.46
950317
, 百拇医药
1.810
2.74
4.490
98.1
0.61
4 讨论
4.1 用5%NaHCO3洗涤，除去黄芪中氨基酸等酸性成分。采用水饱和的正丁醇萃取，背景干扰少，突出了黄芪甲甙的斑点。但在黄芪甲甙的斑点上盖有一个较大的黄色斑点，在层析缸内放1小杯氨水，在碱性环境下展开，黄色斑点 Rf值减小，与黄芪甲甙斑点分开。
4.2 本法展开时间3.5～4 h，展距约16～17 cm，Rf值0.27左右。
, 百拇医药
4.3 本法展开温度不宜超过25℃，湿度也不宜过大，否则展开时间延长。层析缸要密封，特别当温度大于25℃时，应用胶布将盖子四周封严，否则展开剂中甲醇易挥发掉而使得展开时间延长。显色后烘烤时间不满7 min，则显色稳定性会差些，同样温度亦不宜太高，太高了稳定性差些。显色后必须封板，否则随时间延长，峰面积会减小而使结果偏低。
4.4 检测样品需同时点标准品，并注意每次使用的薄层板应为同一批号，否则，应重新绘制标准曲线。
作者简介：芮春兰(1971-)，女(汉族)，江苏南京市人，现任南京济民医院中药师，学士学位.
参考文献：
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典，1990年版1部[M].1990∶158
[2]王兰霞，张伯崇，高建帮，等.贞芪扶正冲剂中黄芪甲甙的薄层扫描测定[J].中成药，1992，14(11)∶16
[3]李 玲，苏 键.黄芪及其复方制剂中黄芪甲甙的薄层扫描法测定[J].中成药，1993，15(16)∶10～11
收稿日期：1999-08-30
修订日期：1999-11-12, 百拇医药
单位：芮春兰(南京济民医院 210094)；王龙(博福(益普生)天津制药有限公司南京办事处，江苏 南京 210002)
关键词：肾炎冲剂；黄芪甲甙；薄层扫描
时珍国医国药000320 提要 本实验采用薄层扫描法测定了肾炎冲剂中黄芪甲甙的含量。方法简单，重现性良好。平均变异系数 CV=2.57%，平均回收率
=97.1%。中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1008-0805(2000)03-0214-02
肾炎冲剂是南京济民医院临床用于治疗肾炎的有效制剂。具有服用方便，疗效显著等优点。主要由黄芪、小青草、甘草等成分组成。本实验研究了其中的主药黄芪的定性、定量，以控制药品的内在质量。
, 百拇医药
1 仪器、药品及试剂
1.1 仪器：Cs-930薄层扫描仪(日本岛津)，微量进样器(上海安亭微量进样器厂)，硅胶G板(自制，厚约0.2～0.3 mm，105℃活化1 h)，薄层色谱缸(北京玻璃缸厂)。
1.2 药品：均由南京市济民医院中药库房提供，由该院中药房主任顾宝新鉴定为正品，符合1990年版《中国药典》。
试剂：黄芪甲甙对照品(购于南京药物研究所，纯度99.2%)，其余所用试剂均为分析纯。
2 肾炎冲剂的制备：
2.1 水提取→醇沉→清膏
2.1.1 取雷公藤不去根皮的根，加水12倍量冷浸1 h后煮沸1 h，过滤。滤渣加水10倍量煮沸45 min，过滤。合并滤液浓缩至1∶1，加乙醇使含醇量达75%，冷藏36 h后抽滤，滤液回收乙醇至无醇味即得清膏A。
, 百拇医药
2.1.2 取小青草加水15倍量，冷浸1 h后煮沸1 h，过滤。滤渣加水12倍量，煮沸0.5 h后过滤，合并滤液，浓缩至1∶1。
2.1.3 取黄芪、甘草等余药加水12倍量，冷浸1 h后煮沸1 h，过滤。滤渣加水10倍量煮沸45 min，过滤。合并滤液再与2.1.2中所得滤液合并，浓缩至1∶1，加乙醇使含醇量达60%，冷浸36 h后抽滤，滤液回收乙醇到无醇味即得浸膏B。
2.2 冲剂的制备：合并清膏A+B，浓缩至相对密度1.25(60℃测)，加辅料制软材，14目筛挤压制粒，≤70℃干燥，12目筛整粒，分装(10 g/袋)即得。
3 黄芪甲甙的含量测定
3.1 实验条件：
层析条件：硅胶G板。
, http://www.100md.com
展开剂[3]：氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)，10℃以下放置取下层液。
显色剂[2]：10%硫酸乙醇液，喷雾显色。
显色条件[2]：105℃烘7 min，上盖玻板，胶布密封，30 min后扫描。
扫描条件[2]：单波长反射法锯齿扫描， λs=510 nm。狭逢1.25 mm×1.25 mm，线性参数 Sx=3。
3.2 对照品液与供试品液的制备
3.2.1 对照品液：精称105℃恒重3 h后的黄芪甲甙10.31 mg，以甲醇溶解并定溶于5 ml容量瓶中，此为对照品液，浓度为2.06 mg/ml。
, http://www.100md.com
3.2.2 样品液[3]：称取冲剂50.0 g(研细)，用水饱和的正丁醇提取5次(80，40，40，40，40 ml)，合并正丁醇液，用5% NaHCO3洗涤3次(20，20，20 ml)，再以水洗1次(20 ml)，弃水液，取正丁醇液于水浴上蒸干，用甲醇定容于2 ml容量瓶中取得。
3.2.3 阳性对照品液：取黄芪10 g，加水100 ml冷浸1 h后煮沸1 h，过滤。滤渣加水80 ml煮沸45 min，过滤，合并滤液浓缩1∶1，以水饱和正丁醇萃取5次(10，10，10，10，10 ml)，合并正丁醇液，以5%NaHCO3洗涤3次(10，10，10 ml)，再用水洗涤1次(10 ml)，取正丁醇液，水浴蒸干，以甲醇定容于2 ml容量瓶中即得。
3.2.4 阴性对照品液：按原工艺制备冲剂，缺少黄芪，其他药不变。按样品液提取方法提取。
, 百拇医药
3.3 薄层层析：精密吸取对照品液5 μl，样品液8 μl，阳性对照样液8 μl，阴性对照品液8 μl，点于同一板上，按上述条件，依上行法展开即得如下色谱图(见图1)。
图1
1.黄芪甲甙
2.样品液
3.阳性对照
4.阴性对照
3.4 线性关系：精密吸取对照品液1，2，3，4，5，6，7 μl点同一板上，依上述条件展开，显色，扫描，测得峰面积值，结果见表1。表明黄芪甲甙在1～5 μl之间浓度与峰面积是一条不过原点的直线(见图2)。回归方程是， Y=443.97 X+111 7.8， γ=0.998 24。
, http://www.100md.com
图2
表1 标准曲线扫描结果 点样量
峰面积值
点样量
峰面积值
1
212 0.3
2
283 0.34
3
389 0.7
4
471 5.4
, http://www.100md.com
5
575 0.61
6
630 9.7
7
656 3.58
3.5 稳定性：取对照品液5 μl点于薄层板上，展开，显色，扫描1次/30 min，取3.5 h测定结果，峰面积基本不变。见表2。 CV=1.12%， n=11。表2 稳定性扫描结果(n=11) 时间/h
面积
时间/h
面积
0.5
, http://www.100md.com
5 518.7
1
5 518.7
1.5
5 513.2
2
5 514.7
2.5
5 503.8
3
5 507.6
3.5
5 501.5
, 百拇医药
4
5 471.5
4.5
5 428.5
5
55 385.7
5.5
5 332.6
3.6 精密性实验：分别在2块板上点标准品液4 μl及样品液7 μl，各点6个点。依上法操作得扫描值。前者 CV=0.49%，后者 CV=2.9%。见表3、表4。 n=6。表3 标准品精密性扫描结果(n=6) 点样量
峰面积值
, http://www.100md.com
点样量
峰面积值
4
4 578.6
4
4 561.3
4
4 596.5
4
4 580.2
4
4 548.2
4
, http://www.100md.com
4 610.5
表4 样品精密性扫描结果 点样量
峰面积值
点样量
峰面积值
7
4 780.2
7
4 861.5
7
4 896.5
7
4 561.5
, http://www.100md.com
7
4 669.7
7
4 920.8
3.7 样品含量测定：取5批不同批号的冲剂50.0 g(研细)，按样品液制备方法制得样品液。在同一板上分别点上标准品液2个点，点样量为3，5 μl，同时点5批不同的样品液，点样量都是7 μl，按上述条件展开，显色，扫描得积分面积值，按外标两点法计算黄芪甲甙的含量，结果见表5。表5 肾炎冲剂中黄芪甲甙含量测定 批号
测定值/mg.g-1
CV
, 百拇医药
(%)
第1次
第2次
第3次
平均值
950307
0.035 1
0.036 1
0.036 5
0.035 9
2.01
950310
, http://www.100md.com
0.035 8
0.036 3
0.036 5
0.036 2
0.99
950312
0.035 1
0.034 6
0.035 0
0.034 9
0.035 4
0.76
, 百拇医药
2.57
950315
0.034 7
0.034 0
0.033 6
0.034 1
1.63
950317
0.035 8
0.036 4
0.036 1
0.036 1
, 百拇医药
0.83
3.8 加样回收实验：称取已知含量的冲剂50.0 g，准确加入定量的黄芪甲甙，按样品液制备方法提取，依上法测定，结果见表6。表6 加样回收实验结果(n=3) 批号
原有量/mg
加入量/mg
检出量/mg
回收率
(%)
CV
(%)
(%)
, http://www.100md.com
950307
1.795
2.83
4.518
96.1
0.34
950310
1.810
2.56
4.337
98.7
0.32
950312
, 百拇医药
1.745
2.19
3.879
97.3
0.57
97.16
950315
1.705
2.05
3.660
95.6
0.46
950317
, 百拇医药
1.810
2.74
4.490
98.1
0.61
4 讨论
4.1 用5%NaHCO3洗涤，除去黄芪中氨基酸等酸性成分。采用水饱和的正丁醇萃取，背景干扰少，突出了黄芪甲甙的斑点。但在黄芪甲甙的斑点上盖有一个较大的黄色斑点，在层析缸内放1小杯氨水，在碱性环境下展开，黄色斑点 Rf值减小，与黄芪甲甙斑点分开。
4.2 本法展开时间3.5～4 h，展距约16～17 cm，Rf值0.27左右。
, 百拇医药
4.3 本法展开温度不宜超过25℃，湿度也不宜过大，否则展开时间延长。层析缸要密封，特别当温度大于25℃时，应用胶布将盖子四周封严，否则展开剂中甲醇易挥发掉而使得展开时间延长。显色后烘烤时间不满7 min，则显色稳定性会差些，同样温度亦不宜太高，太高了稳定性差些。显色后必须封板，否则随时间延长，峰面积会减小而使结果偏低。
4.4 检测样品需同时点标准品，并注意每次使用的薄层板应为同一批号，否则，应重新绘制标准曲线。
作者简介：芮春兰(1971-)，女(汉族)，江苏南京市人，现任南京济民医院中药师，学士学位.
参考文献：
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典，1990年版1部[M].1990∶158
[2]王兰霞，张伯崇，高建帮，等.贞芪扶正冲剂中黄芪甲甙的薄层扫描测定[J].中成药，1992，14(11)∶16
[3]李 玲，苏 键.黄芪及其复方制剂中黄芪甲甙的薄层扫描法测定[J].中成药，1993，15(16)∶10～11
收稿日期：1999-08-30
修订日期：1999-11-12, 百拇医药